免疫組化，其實方法和操作都不是很難，關鍵是結果出現(xiàn)異常時如容易出現(xiàn)組織脫片該如何去解決？我們先了解一下組織脫片的原因有哪些？
1.空白片少，經不起反復折騰；
2.回顧性研究中不可能使用新鮮的切片組織；
3.某些單位先前并沒有使用防脫載玻片保留組織標本等。
針對這些問題，可以嘗試如下改良方法。

針對這些問題，可以嘗試如下改良方法。
如上所說，先采用酶修復，后熱修復，一般熱修復是直接置于相應的修復液中煮沸，期間還有可能使用高壓鍋。
1. 酶修復，各自抗原特性選擇，有些時候酶修復的時間是極其難把握的。時間太長，消化過頭容易脫片；時間太短，抗原暴露不充分，這些都影響實驗結果。建議稀釋濃度，延長修復時間。
2. 熱修復，理論基礎：抗原修復時僅需要組織與修復液接觸，且只要薄薄的一層就能反應。
改良一：敞開高壓鍋蓋，置一鐵架于修復液面，其上放置玻片，玻片上滴加修復液體（鐵架高度以沸騰修復液不會觸及玻片為妥）。為了防止玻片上的修復液揮發(fā)，可在滴加修復液后蓋上蓋玻片，提供熱源使修復液保持沸騰狀態(tài)，使用熱蒸汽加熱。

優(yōu)點：避免了組織在液體中的劇烈沸騰，減少脫片。
缺點：降低了抗原修復的溫度，可能導致某些抗原無法達到其修復所需溫度，使用此法可能需要適當延長熱修復時間。
改良二：修復液煮沸后，滴加于載玻片上，覆蓋蓋玻片，用實驗室常見的封口膜將玻片和蓋玻片包繞（包繞的目的不是為了隔絕空氣，而是防止蓋玻片移動導致修復液在組織表面揮發(fā)，封口膜受熱后收縮，即可固定）。將包繞好的玻片置入鐵架上，按原先操作繼續(xù)（可放入高壓鍋中）。

優(yōu)點：避免了改良一中可能無法達到所需修復溫度的問題，可以放入高壓鍋中。
缺點：片子變成平鋪展開，一次所能做的片子數(shù)目減少。

需要注意的是，使用蓋玻片后，尤其是使用封口膜后，揭片的過程一定要輕柔，用鑷子，避免徒手操作，如遇到揭片困難，可適當用 PBS 沖洗，不可暴力揭片，否則適得其反；另外由于每個實驗室條件不同，還應根據(jù)自己所在實驗室條件調整。

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